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    感受態細胞(T克隆載體連接原理)

    文章分類:環保知識

    日期:2020-11-22 04:37 3

    OverExpress C43(DE3)感受態細胞

    產品編號MCC0024

    產品名稱OverExpress C43(DE3)感受態細胞

    規格100μl*10

    儲存條件:-80℃。

    1.產品簡介:

    本產品是采用大腸桿菌OverExpress C43(DE3)感受態細胞菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞。OverExpress C43(DE3) 菌株具有很強的表達毒性蛋白和疏水性蛋白的能力,可用于pET系列,pGEX,pMAL等質粒的蛋白表達。

    基因型:F–ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)

    特點:1.OverExpress C41(DE3)、OverExpress C41(DE3)均起源于 BL21(DE3) ,可以高效表達毒性蛋白或疏水性蛋白。OverExpress C41(DE3)跟BL21(DE3)的區別在于其基因組含有至少一個未知突變,這個未知突變使其獲得了高效表達毒性蛋白 (1-5)的能力,此突變位點參與大腸桿菌表達毒性蛋白時的細胞死亡途徑。2.OverExpress C43(DE3)是通過篩選OverExpress C41(DE3)對另一個不同毒性蛋白的抗性菌株獲得。所以OverExpress C43(DE3) 菌株與 BL21(DE3)相比擁有至少兩個未知突變,正是這兩個未知突變使其獲得了更廣泛的表達毒性蛋白或疏水性蛋白的能力。pUC19質粒檢測,轉化效率可達108cfu/μg DNA。

    2.使用說明:

    1。取100 l感受態細胞,冰浴融化。

    2。感受態細胞融化后,將目標DNA加入感受態細胞懸液(根據實際情況,通常100 l感受態細胞可飽和1 ng超螺旋質粒DNA),用移液管輕輕吹混,冰浴30分鐘。在

    3.42下加熱45秒,然后迅速將離心管轉移到冰浴中,在冰上靜置2-3分鐘,在此過程中不要搖動離心管。

    4。向每個離心管中加入450 l無菌SOC或LB培養基(不含抗生素),混合均勻,放入37的搖床中,以150轉/分的速度搖動45 ~ 60 min,使細菌復蘇。

    5。根據實驗要求,取適量轉化的感受態細胞,加入到含有相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基中,用無菌涂桿將細胞均勻鋪開,將平板置于37直至液體被吸收,37下倒置培養12 ~ 16小時。

    3.注意事項:

    1。新解凍的細胞具有最高的轉化效率,避免了重復解凍。

    2。質粒質量和濃度的差異會降低轉化效率。

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